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細胞和組織PCR免核酸提取試劑盒Nu-C01-Plus使用方法
更新時間:2022-09-09   點擊次數(shù):568次


細胞和組織PCR 試劑盒Plus(免核酸提取)

貨號:Nu-C01

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒可用于動物組織或細胞DNA 的克隆、重組細胞株鑒定、DNA 病毒鑒定、STR 鑒定等。TC-DNA-Lysis 采用配方,10 分鐘內(nèi)裂解各種細胞和組織。使用過程中無需大體積樣本、無需反復(fù)離心,從而獲得高質(zhì)量的DNA 模板。經(jīng)過驗證,該試劑盒可以對單個細胞或10 個病毒粒子進行檢測。

本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等域。

試劑盒組成

保存條件

-20oC 保存。

使用將TC-DNA-Lysis 室溫充分混勻,使用可4℃保存。

2×TaqMix(With Dye)溶解后需置于冰上,避免反復(fù)凍融。

需要準備

金屬恒溫浴、離心機、PCR 儀

使用方法

一、不同樣品的處理方法

1. 組織液的處理

(1)組織液包括組織研磨液、細胞懸液等。取10 μL組織液置于離心管中。

(2)加入20 μLTC-DNA-Lysis。

(3)充分混勻。

(4)置于55℃作用5 分鐘,然后95℃作用5min。溶液即為DNA 模板。

2. 組織塊的處理

(1)用眼科剪剪取1-2mm 的組織塊,并將組織塊剪成肉泥狀。

(2)加入20 μL TC-DNA-Lysis。

(3)充分混勻。

(4)置于55℃作用5 分鐘,然后95℃作用5min。

(5)10,000 轉(zhuǎn)離心60 取上清。上清即為DNA 模板。

3. 在DNase free 的離心管中配制PCR 反應(yīng)體系

4. 按照以下方法設(shè)定PCR 反應(yīng)

注意事項

一、試劑盒使用注意事項

(1)所有試劑應(yīng)按照適合溫度儲存。請勿反復(fù)凍融。

(2)使用后均需要對操作區(qū)進行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無酶耗材。

(3)TC-DNA-Lysis 采用配方,若出現(xiàn)肉眼可見小球狀物質(zhì)屬于正?,F(xiàn)象。

(4)TC-DNA-Lysis 頻繁使用,可在4℃保存。不使用可放-20℃保存。

二、樣本注意事項

(1)細胞在含/不含血清的環(huán)境中均可直接使用試劑盒。

(2)擴增2kb 以內(nèi)片段,細胞樣品濃度不超過1000 個細胞。如若擴增片段超過2kb,可適當提高細胞濃度。

(3)不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進行處理,防止交叉污染導(dǎo)致檢測結(jié)果偏差。

三、試劑盒使用過程中注意事項

(1)PCR 過程中推薦使用陰性對照和陽性對照。

(2)整個過程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中,防止形成環(huán)境污染。

(3)2×Master TaqMix(With Dye)已包含染料,可在反應(yīng)結(jié)束后直接進行瓊脂糖凝膠電泳。

(4)PCR 產(chǎn)物3’末端含有A,可直接進行TA 克隆。

四、試劑盒使用后注意事項

(1)TC-DNA-Lysis 處理后的DNA 模板可在-20℃保存至少1 個月。避免反復(fù)凍融,防止基因組斷裂。

(2)PCR 反應(yīng)完成后,嚴禁在實驗區(qū)開蓋。應(yīng)在污染區(qū)進行瓊脂糖凝膠電泳,防止氣溶膠污染。

(3)為防止試劑盒污染,請勿將不同批號試劑盒混用。

檢測實例

常見問題解析


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