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免疫共沉淀生物技術服務
更新時間:2019-12-25   點擊次數(shù):1058次

服務簡介

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究兩種蛋白質(zhì)相互作用的有效方法。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔,已成為研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。

當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在argarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白,那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離,對B蛋白進行檢測,進而證明兩者間的相互作用。

這種方法得到的目的蛋白是在細胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的,符合體內(nèi)實際情況,得到的結(jié)果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。

 

免疫共沉淀服務價格與周期

服務項目

內(nèi)容

價格

服務周期

免疫共沉淀

我們進行CO-IP和Western Blot檢測

詢價

3-4周

 

免疫共沉淀服務步驟

(1)轉(zhuǎn)染后24-48 h 可收獲細胞,加入適量細胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C, 大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清;

(2)取少量裂解液以備Western blot分析,剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過夜;

(3)取10μl protein A 瓊脂糖珠,用適量裂解緩沖液洗3 次,每次3,000 rpm離心3 min;

(4)將預處理過的10μl protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h,使抗體與protein A瓊脂糖珠耦聯(lián);

(5)免疫沉淀反應后,在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min,將瓊脂糖珠離心至管底;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3-4次;后加入15μl的2×SDS 上樣緩沖液,沸水煮5分鐘;

(6)SDS-PAGE, Western blotting或質(zhì)譜儀分析。

客戶提供

客戶提供蛋白樣品和沉淀用抗體;

新鮮的樣本材料(組織、細胞或蛋白溶液);

用于western blot的一抗。

生物服務承諾
免疫共沉淀電子圖片及分析結(jié)果;
相互作用蛋白鑒定結(jié)果,質(zhì)譜鑒定結(jié)果和(或)western blot鑒定結(jié)果。

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